Investigatia FibroMax, dezvoltata de BioPredictive, constituie o combinatie de 5 teste non-invazive diferite: FibroTest, ActiTest, SteatoTest, NashTest si  AshTest. Are la baza un algoritm care combina rezultatele obtinute la determinarea unor markeri biochimici serici (alfa-2macroglobulina, haptoglobina, apolipoproteina A1, bilirubina totala, gamaglutamiltranspeptidaza – GGT, alanin-aminotransferaza ALT, aspartat – aminotransferaza AST, glicemie bazala, colesterol, trigliceride) cu varsta, sexul, greutatea si inaltimea pacientului pentru a evalua gradul afectarii hepatice.

Astfel:

- FibroTest masoara gradul fibrozei (corespunzator stadiilor F0-F4 ale scorului METAVIR);

-ActiTest masoara gradul de activitate necro-inflamatorie la pacienti cu hepatita virala cronica B sau C (corespunzator gradelor A0-A3 ale scorului METAVIR);

-SteatoTest evalueaza steatoza hepatica, cauza frecventa de crestere a transaminazelor ALT si GGT (corespunzator stadiilor 0-3 de steatoza: S0 -S3);

-NashTest evalueaza prezenta steatohepatitei non-alcoolice la pacienti obezi, cu dislipidemie, rezistenta la insulina sau diabet (corespunzator celor 3 grade din clasificarea lui Kleiner: No: „NOT NASH”, N1:„Borderline NASH” si N2 : „NASH”);

-AshTest masoara gradul afectarii hepatice la pacientii cu un consum excesiv de etanol (corespunzator celor 4 grade H0-H3).

Tehnologia dezvoltata de Biopredictive utilizeaza algoritmuri brevetate si validate stiintific, care sunt supuse unui control de calitate foarte strict.

FibroTest (FT) a fost folosit initial la pacientii cu hepatita cronica C; ulterior a fost validat in hepatita B, hepatita D, coinfectia HIV, boala alcoolica a ficatului si ficatul gras non-alcoolic. Astfel FT constituie un marker universal de fibroza, cel putin pentru cele mai frecvente afectiuni hepatice cronice. ActiTest este singurul marker non-invaziv validat in laborator pentru activitatea necroinflamatorie, utilizat exclusiv la pacientii cu hepatita cronica B sau C. La aceste 2 teste s-au adaugat alte 3 investigatii care au rolul de a evalua factorii asociati sau agravanti ai fibrozei: steatoza hepatica (SteatoTest), steatohepatita non-alcoolica (NashTest) sau steatohepatita alcoolica (AshTest). FibroMax permite efectuarea intr-o singura procedura a acestor 5 teste.

Studiile publicate au demonstrat valoarea predictiva si beneficiile acestei investigatii ca alternativa la biopsia hepatica^2;3;4;5;6.

Pregatire pacient – à jeun (obligatoriu)¹.

Specimen recoltat - sange venos¹. 

Recipient de recoltare - vacutainer fara anticoagulant cu/fara gel separator¹.

Prelucrare necesara dupa recoltare - se separa serul prin centrifugare; se lucreaza in aceeasi zi; daca acest lucru nu este posibil, serul se poate stoca la 2-8°C sau la -20°C¹.

Cauze de respingere a probei – specimene hemolizate sau lipemice¹.

Volum proba - minim 3 mL ser¹. 

Stabilitate proba - serul separat este stabil  3 zile la 2-8° C si protejat de lumina (pentru bilirubina); timp indelungat  la -20° C¹.

Metoda - in laboratorul Synevo dozarea celor zece markeri biochimici se realizeaza prin metode standardizate in conformitate cu recomandarile tehnice furnizate de BioPredictive:

• metoda imunoturbidimetrica pentru alfa-2macroglobulina, haptoglobina si apolipoproteina A1;

• metoda enzimatica cu piridoxal fosfat standardizata in conformitate cu IFCC pentru ALT si AST;

• metoda enzimatica standardizata in raport cu metoda Szasz pentru GGT;

• metoda colorimetrica (reactie diazo) pentru bilirubina totala.

• metoda enzimatica – colorimetrica pentru colesterol, trigliceride si glucoza¹.

Interpretarea rezultatelor

Rezultatele obtinute la markerii serici sunt introduse, cu ajutorul unui cod de acces, pe site-ul BioPredictive unde se va genera un raport cu scorurile de fibroza, activitate necroinflamatorie, steatoza hepatica, steatohepatita non-alcoolica, steatohepatita alcoolica, pentru fiecare pacient testat¹.

FibroTest

Rezultatele sunt raportate in grade:

F0 – absenta fibrozei

F1 – fibroza portala

F2 – fibroza „in punte” cu rare septuri

F3 – fibroza in punte cu numeroase septuri

F4 – ciroza

ActiTest

Activitatea necroinflamatorie este raportata in grade:

A0 – absenta activitatii

A1 – activitate minima

A2 – activitate moderata

A3 – activitate severa

SteatoTest

Rezultatele sunt exprimate printr-un scor:

S0 – absenta steatozei

S1 – steatoza minima (<5% din hepatocite cu steatoza)

S2 – steatoza  moderata (6-32% din hepatocite cu steatoza)

S3 – steatoza severa (33-100% din hepatocite cu steatoza)

NashTest

Rezultatul este incadrat intr-un grup:

N0 – No Nash (fara steatohepatita non-alcoolica)

N1 – Borderline Nash (steatohepatita non-alcoolica de granita)

N2 – Nash (steatohepatita non-alcoolica prezenta)

AshTest

Rezultatul este incadrat intr-un grup:

H0 – fara steatohepatita alcoolica

H1 – steatohepatita alcoolica minima

H2 – steatohepatita alcoolica moderata

H3 – steatohepatita alcoolica severa⁶.

Limite si interferente

Aceasta investigatie nu este recomandata la pacienti cu hepatita acuta (cresc valorile ALT), hemoliza acuta (scad valorile haptoglobinei), stari inflamatorii acute (cresc valorile alfa2-macroglobulinei) sau colestaza extrahepatica.

La pacientii cu hemoliza cronica sau sindrom Gilbert se va solicita consultul unui specialist pentru interpretarea rezultatelor.

Testul nu a fost inca validat la pacientii cu transplant hepatic^2;6.

Bibliografie

1. Laborator Synevo. Referintele specifice tehnologiei de lucru utilizate 2010. Ref Type: Catalog.

2. Morra R, Munteanu M, Imbert-Bismut F, Messous D, Ratziu V, Poynard T. FibroMax: Towards a new universal marker of hepatic disease? In Expert Rev Mol Diagn. 2007 Sep;7(5):481-90.

3. Poynard T, ”Diagnostic Value of Two New Biomarkers (SteatoTest and NASH Test) for the Prediction of Steatosis and Nonalcoholic Steatohepatitis (NASH),” abstract #86 presented at the 41st Annual European Association for Study of Liver Disease meeting, April 26-30, 2006, Vienna, Austria.

4. Poynard T, Ratziu V, Naveau S, et al, ”The Diagnostic Value of Biomarkers (SteatoTest) for the Prediction of Liver Steatosis,” Comp Hepatol, 2005, 23(4):10. 16375767

5. Ratziu V, Massard J, Charlotte F, et al, ”Diagnostic Value of Biochemical Markers (FibroTest- FibroSURE) for the Prediction of Liver Fibrosis in Patients With Nonalcoholic Fatty Liver Disease,” BMC Gastroenterol, 2006.

6. www.biopredictive.com. Reference Type: Internet Communication.

In mod traditional, biopsia hepatica reprezinta metoda “gold-standard” pentru evaluarea leziunilor histologice ale ficatului si in consecinta pentru stabilirea gradului afectarii hepatice. Cu toate acestea biopsia prezinta mai multe incoveniente:

-datorita caracterului invaziv nu este acceptata de toti pacientii;

-poate asocia complicatii minore (circa 30% din pacienti prezinta durere) sau severe pana la deces (in 0.03% din cazuri);

-erori semnificative de esantionaj (pana la 40% in stadializarea fibrozei);

-variabilitate importanta intra- si inter-examinator⁶.

Investigatia FibroTest-ActiTest (FT/AT), dezvoltata de BioPredictive, constituie o alternativa non-invaziva la biopsia hepatica care a fost validata clinic la pacienti cu hepatita cronica B si C, hepatopatie indusa de etanol si steatoza hepatica non-alcoolica. Are la baza un algoritm care combina rezultatele obtinute la determinarea unor markeri biochimici serici in scopul evaluarii gradului de fibroza si a activitatii necroinflamatorii. Astfel, FT masoara gradul fibrozei prin combinarea urmatorilor markeri: alfa-2macroglobulina, haptoglobina, apolipoproteina A1, bilirubina totala, gamaglutamiltranspeptidaza-GGT, iar AT estimeaza gradul de activitate (necroza si inflamatie) prin asocierea alanin-aminotransferazei-ALT la markerii de mai sus. Rezultatele testului includ un scor de fibroza si unul de activitate necro-inflamatorie, ale caror valori sunt cuprinse in intervalul 0-1 (de la absenta bolii sau o afectare minima pana la fibroza sau activitate necroinflamatorie severa). Algoritmul ajusteaza rezultatele in functie de varsta si sex^3;5.

De la lansarea sa in 2002, validarea si standardizarea analitica a FT/AT au fost realizate de-a lungul a 50 studii clinice. La ora actuala aceasta strategie diagnostica este folosita in 33 tari de pe intreg globul.

Conform studiilor efectuate, AT/FT are o valoare diagnostica mai mare decat alti markeri hepatici non-invazivi si, spre deosebire de biopsia hepatica, furnizeaza o evaluare non-invaziva a stadiului de fibroza si a gradului de activitate necroinflamatorie corespunzatoare stadiilor F0-F4 si gradelor A0-A3 ale scorului Metavir. Se recomanda ca testul sa fie repetat la fiecare 6 luni in cazul fibrozei moderate si anual daca fibroza este minima.

Un studiu prospectiv care a inclus 537 pacienti cu hepatita C si care a comparat rezultatele biopsiei hepatice cu cele obtinute la FT/AT a indicat o discordanta intre cele 2 metode la 29% din pacienti, intr-un procent de 16% pentru stadiile fibrozei si 17% pentru gradele de activitate. Discordanta a fost atribuita esecului FT/AT in 2.4% din cazuri si a biopsiei hepatice la 18.1% din pacienti^1;6.

O centralizare a rezultatelor obtinute la 8540 de FT/AT a evidentiat faptul ca scorurile medii obtinute la aceasta investigatie non-ivaziva s-au asociat intr-un mod linear cu stadiile fibrozei si gradele activitatii necroinflamatorii. Astfel, valoarea diagnostica a testului a fost aceeasi atat pentru stadiile moderate de fibroza si activitate necro-inflamatorie cat si pentru cele extreme. In cazul infectiei cu virusul hepatitei B FT/AT isi mentine aceeasi valoare diagnostica independent de originea etnica, sex, prezenta/absenta AgHBe si valoarea transaminazelor; de asemenea scorurile de fibroza si activitate necroinflamatorie au valoare predictiva in ceea ce priveste dezvoltarea complicatiilor in urmatorii 4 ani (intr-un studiu prospectiv s-a constatat ca la scoruri de fibroza < 0.27 si la cele de activitate necroinflamatorie < 0.29 nu a aparut nici o complicatie in decurs de 4 ani). In cazul infectiei cu virusul hepatitei C FT/AT isi mentine aceeasi valoare diagnostica independent de originea etnica, sex, genotip, incarcatura virala si alte co-morbiditati ; de asemenea scorurile de fibroza au valoare predictiva in ceea ce priveste dezvoltarea complicatiilor in urmatorii 5 ani (intr-un studiu prospectiv s-a constatat ca la scoruri de fibroza < 0.32 nu a aparut nici o complicatie in decurs de 5 ani).

Testul a fost validat si pentru urmatoarele categorii de pacienti: copii, subiecti >65 ani, pacienti cu insuficienta renala, transplant renal, hemofilie sau boli inflamatorii cronice.

Cercetatorii au concluzionat ca FT/AT constituie o alternativa eficienta din punct de vedere al costului la biopsia hepatica^1;2;5;6.

Pregatire pacient – à jeun (de preferat)⁴.

Specimen recoltat - sange venos⁴. 

Recipient de recoltare - vacutainer fara anticoagulant cu/fara gel separator⁴.

Prelucrare necesara dupa recoltare - se separa serul prin centrifugare; se lucreaza in aceeasi zi; daca acest lucru nu este posibil, serul se poate stoca la 2-8°C sau la -20°C⁴.

Cauze de respingere a probei – specimene hemolizate sau lipemice⁴.

Volum proba - minim 3 mL ser⁴ 

Stabilitate proba - serul separat este stabil  3 zile la 2-8° C si protejat de lumina (pentru bilirubina); timp indelungat  la -20° C⁴.

Metoda - in laboratorul Synevo dozarea celor sase  markeri biochimici se realizeaza prin metode standardizate in conformitate cu recomandarile tehnice furnizate de BioPredictive:

• metoda imunoturbidimetrica pentru alfa-2macroglobulina, haptoglobina si apolipoproteina A1;

• metoda enzimatica cu piridoxal fosfat standardizata in conformitate cu IFCC pentru ALT;

• metoda enzimatica standardizata in raport cu metoda Szasz pentru GGT;

• metoda colorimetrica (reactie diazo) pentru bilirubina totala⁴.

Interpretarea rezultatelor

Rezultatele obtinute la markerii serici sunt introduse, cu ajutorul unui cod de acces, pe site-ul BioPredictive unde se va genera un raport cu scorurile de fibroza si activitate necroinflamatorie pentru fiecare pacient testat⁴.

Limite si interferente

Aceasta investigatie nu este recomandata la pacienti cu hepatita acuta (cresc valorile ALT), hemoliza acuta (scad valorile haptoglobinei), stari inflamatorii acute (cresc valorile alfa2-macroglobulinei) sau colestaza extrahepatica.

La pacientii cu hemoliza cronica sau sindrom Gilbert se va solicita consultul unui specialist pentru interpretarea rezultatelor⁶.

Bibliografie

1. Gilles Morali, Yaacov Maor, Rachel Klar, Marius Braun, Ziv Ben, Yoram Bujanove, Eli Zuckerman, Sarah Boger, Philippe Halfon. Fibrotest-Actitest™: The Biochemical Marker of Liver Fibrosis –The Israeli Experience. In IMAJ 2007;9:588–591.

2. Halfon P., Bourlier M., Deydier R. et al. Independent prospective multicentric validation of biochemical markers (FibroTest-ActiTest) for prediction of liver fibrosis and activity in patients with chronic hepatitis C: the Fibropaca study. In Am J Gastroenterol 2006; 101: 547-55.

3. Ioan Sporea, Alina Popescu. Biopsia sau markerii non-invazivi pentru evaluarea hepatopatiilor cronice difuze. In Gastro.ro nr.6, 2007.

4. Laborator Synevo. Referintele specifice tehnologiei de lucru utilizate 2010. Ref Type: Catalog.

5. Thierry Poynard; Rachel Morra; Philippe Halfon; Laurent Castera; Vlad Ratziu; Françoise Imbert-Bismut; Sylvie Naveau; Dominique Thabut; Didier Lebrec; Fabien Zoulim; Marc Bourliere; Patrice Cacoub; Djamila Messous; Mona Munteanu; Victor de Ledinghen. Meta-Analyses of FibroTest Diagnostic Value in Chronic Liver Disease In BMJ Gastroenterology, 2007.

6. www.biopredictive.com. Reference Type: Internet Communication.