facebook

Citochimie peroxidaze

55 Lei

Citochimia se bazează pe studiul microscopic al componenţilor chimici celulari: nucleoproteine, proteine, hidraţi de carbon, lipide şi enzime.

Coloraţiile citochimice oferă informaţii în legătură cu linia celulară şi diferenţierea celulelor hematopoietice şi joacă un rol important în evaluarea anomaliilor hematologice, în special în diagnosticul diferenţial şi clasificarea bolilor maligne ale sângelui.

Un principiu de care trebuie ţinut seama este faptul că, o reacţie pozitivă este întotdeauna valoroasă, în timp ce reacţia negativă este neconcludentă. Pentru certitudine, în majoritate cazurilor reacţiile citochimice se practică cu un martor pozitiv al reacţiei1;2.

Reacţii citochimice

LAM – M1,M2

LAM – M3

LAM – M4

LAM – M5

LAM –M6

LAM – M7

LAL

 

MPO

 

+

 

++

 

+

 

– , +/-

 

 

 

 

PAS

 

– , +/-

 

– , +

 

– , +/-

 

– , +

 

+

 

+

 

– , + , ++

 

ANAE

 

 

– , +

 

+

 

++

 

+

 +

 

– , +/-

 – negativ ; +/- slab pozitiv ; + pozitiv ;+ + intens pozitiv

Un diagnostic corect de laborator al LAM, cu subtipurile FAB şi LAL necesită coroborarea datelor de microscopie optică – morfologie şi coloraţii citochimice – cu imunofenotiparea, eventual datele de microscopie electronică.

Informaţii generale

Reacţia MPO este coloraţia citochimică de elecţie pentru recunoaşterea celulelor granulocitare, prezenţa sa reprezentând singurul marker fără echivoc al diferenţierii mieloide. Mieloperoxidaza este o enzimă localizată în granulaţiile azurofile ale celulelor seriilor granulocitare şi monocitare şi în granulaţiile specifice ale eozinofilelor4. 

Principiul reacţiei  

Peroxidazele celulare descompun apa oxigenată şi eliberează oxigenul, care oxidează benzidina şi generează un compus brun-auriu insolubil şi stabil, localizat în citoplasma celulelor peroxidazo-pozitive1;3.

Recomandări pentru determinarea activităţii peroxidazei

–  diferenţierea leucemiei acute mieloblastice (LAM) de cea limfoblastică (LAL);

–  demonstrarea corpilor Auer;

– detectarea scăderii activităţii, la subiecţii cu deficit de MPO congenitală sau dobândită (în mielodisplazii)1.

Pregătire pacient à jeun (pe nemâncate) sau postprandial (după mese)3.

Specimen recoltat

a) sânge capilar şi/sau aspirat medular – frotiuri

b) se recomandă recoltarea simultană de sânge venos pentru hemogramă3.

Cauze de respingerea probei 

– frotiuri nefixate în maxim 8 ore de la recoltare;

– frotiuri executate din sânge recoltat pe EDTA3.

Recipient de recoltare

a) se execută frotiuri de sange capilar direct pe lame de microscopie;

b) vacutainer cu EDTA K3 (capac mov), pentru hemogramă3.

Cantitate recoltată

a) 3-5 frotiuri;

b) 2 mL3.

Prelucrare necesară după recoltare 

Este preferabil ca fixarea frotiurilor să se facă în primele 30 minute de la recoltare. Eventual, se poate face în primele 8 ore. Amestec fixator: alcool etilic 9 părţi + formol 40% 1 parte. Fixarea se cronometrează 30 secunde, după care frotiurile se spală cu jet de apă de robinet. Frotiurile fixate se pot colora imediat sau se pot păstra cateva zile la temperatura camerei, până la colorare3.

Stabilitate probă

– frotiurile nefixate sunt stabile maxim 8 ore la 18-30ºC;

– frotiurile fixate sunt stabile 5 zile la temperatura camerei3.

Metoda examinare microscopică3.

Interpretarea rezultatelor

Granulele de culoare galben-brună indică prezenţa activităţii peroxidazelor celulare.
Reacţia este intensă  în celulele seriei granulocitare. Martorul pozitiv al reacţiei este reprezentat de granulocitul matur – granule mari în citoplasmă şi peste nucleu. Este discutabil dacă mieloblastul normal este peroxidazo-pozitiv in microscopia optică. Reacţia este pozitivă începând de la stadiul de promielocit; sunt prezente o multitudine de granule galben-brune în citoplasmă, care uneori maschează alte caracteristici citoplasmatice.
Pentru stabilirea diagnosticului de leucemie acută mieloblastică (LAM) cel puţin 3% din blaşti trebuie sa fie peroxidazo-pozitivi. Mieloblaştii prezintă de obicei granulele mari, localizate şi mai reduse numeric decât promielocitele normale. Corpii Auer, rezultaţi din coalescenţa anormală a granulaţiilor azurofile, sunt intens peroxidazo-pozitivi.
Monocitele dau o reacţie negativă sau slab pozitivă. Monoblaştii din leucemia acută monocitară (LAM-M5) sunt de obicei negativi, în timp ce monoblaştii din leucemia acută mielomonocitară (LAM-M4) pot fi slab pozitivi.
Limfocitele şi eritrocitele nu au activitate MPO în nici un stadiu de maturare.
In concluzie, reacţia pozitivă în blaşti indica leucemie mieloblastică sau mielomonocitară1;4;5.

Limite şi interferenţe 

Obţinerea unei reacţii pozitive în blaşti are valoare diagnostică pentru leucemia acută mieloblastică, în timp ce reacţia negativă este neconcludentă. Rezultatul trebuie coroborat cu alte teste citochimice1.

 

Bibliografie

1. Dan Coliţa. Tratat de Medicina Interna-Hematologie, partea a II-a (sub redacţia Radu Păun), ed 1999, 1014-1026.
2. Lothar Thomas. Hematology. In Clinical Laboratory Diagnostics, ed 1998, 520.
3. Laborator Synevo. Referinţele specifice tehnologiei de lucru utilizate 2010. Ref Type: Catalog.
4. Marsha C.Kinney, John N.Lukens. Classification and differentiation of the acute leukemias. In Wintrobe’s Clinical Hematology, Philadelphia ed. 1999, 2211-2220.
5. Shafer J, Canadian Society of Laboratory Technologist Congress, Winnipeg, Manitoba, June 16 to 20, 1996, Workshop Manual, p 167-176.
6. Sherrie L. Perkins. Cytochemical Stains. In Wintrobe’s Clinical Hematology, Philadelphia ed. 1999, 26-27.
Abonează-te la Newsletter