fragmente tisulare, țesut inclus în blocuri de parafină
Informatii generale
Informatii generale Pan-TRK (familia de proteine tip TRK)
Familia receptorilor TRK este formată din trei proteine transmembranare (TRKA, TRKB, TRKC) codificate de genele receptorului neurotrofic al tirozinkinazei (NTRK): (NTRK1, NTRK2, NTRK3). În fiziologia normală, receptorii TRK sunt exprimați în mod preferențial în țesuturi de origine neuronală și ajută la reglarea diferențierii și supraviețuirii celulare; de asemenea, au un rol fiziologic în dezvoltarea sistemului nervos central și periferic. Alterări ale genei NTRK, inclusiv prin mutații punctiforme, variații de splicing, amplificare și fuziuni, pot fi detectate în diferite tipuri de tumori. Fuziunile chimerice care implică genele NTRK1, NTRK2 sau NTRK3 sunt cele mai comune alterări ale NTRK.
Există peste 80 de tipuri de fuziuni de tip NTRK, raportate, iar partenerii chimerici (de fuziune) pot fi ETV6, EML4, LMNA sau TPM3. Aceste evenimente au ca rezultat apariția unor oncogene care se exprimă în mod aberant. Conservarea domeniului kinazic al TRK în aceste fuziuni NTRK induce carcinogeneză prin activarea constitutivă a căilor de reglare a supraviețuirii, proliferării, invaziei și a angiogenezei celulare. Exprimarea proteinei TRK de tip sălbatic în majoritatea tumorilor solide este, în general, minimă și cu prevalență scăzută.
Cu toate acestea, exprimarea proteinei de tip sălbatic TRK poate fi substanțială în anumite țesuturi tumorale neuroendocrine. Întrucât, prezența cazurilor de fuziune chimerică NTRK este rară, iar prevalența este variabilă la nivelul multor tipuri de tumori (0.5–1% din cancere) detectarea fuziunii TRK este o provocare. Astfel, din cauza naturii nediscriminatorii a tehnicilor de imunohistochimie (IHC) în detectarea proteinelor tip TRK de tip sălbatic sau chimeric, tumorile care indică pozitivitate, trebuie să fie evaluate ulterior (confirmate) printr-o metodă moleculară și/ sau citogenică de analiza NTRK.
Au fost caracterizate o serie de variante de splicing, implicând în special NTRK1, iar aceste variante au fost observate atât în țesuturile normale, cât și în cele tumorale, cum ar fi neuroblastomul și leucemia mieloidă acută, unde se presupune că pot juca un rol în tumorigeneză. Activarea constitutivă a receptorului tropomiozin-kinazei (TRK) și a căilor ulterioare de semnalizare din aval, poate avea loc prin inversiuni cromozomiale, deleții sau translocații, care au ca rezultat o fuziune între domeniul C-terminal al tirozin-kinazei aparținând oricăreia dintre genele NTRK și un partener de fuziune genică de tip N- terminal.
Au fost descriși o multitudine de parteneri de fuziune 5′, în aproape toate cazurile, fuziunea eliminând locul de legare a ligandului, ducând la dimerizare și fosforilare, independente de ligand. Prima proteină de fuziune TRK a fost descrisă inițial într-o linie celulară provenită din adenocarcinom colorectal și, la momentul descoperirii, s-a confirmat că implicarea acestei oncogene particulare într-o astfel de fuziune este un eveniment neobișnuit în cancerul de colon.
Mai târziu s-a descoperit că și fibrosarcomul infantil este caracterizat de o fuziune ETV6–NTRK3 care implică o translocare a cromozomilor 12 și 15 și aceeași fuziune a fost raportată ulterior și în carcinomul secretor al sânului și al glandei salivare, fiind în prezent definitorie pentru aceste subseturi de carcinoame.
Fuziunile NTRK au fost, de asemenea, raportate într-un subset de carcinoame tiroidiene, în special la pacienții cu antecedente de expunere la radiații și sunt întâlnite mai rar și în alte tipuri de tumori, cum ar fi carcinoame pulmonare, glioame, unele sarcoame, tumori miofibroblastice inflamatorii și tumori melanocitare. În ultimii ani studiile clinice s-au orientat mai mult către evaluarea terapiilor cu mecanisme moleculare specifice de acțiune, în acest sens studiile vizând fuziunile tip NTRK au fost de mare interes.
Astfel, studii mai recente au demonstrat că terapia cu larotrectinib a demonstrat activitate antitumorală la nivelul celulelor cu activare constitutivă a proteinelor TRK rezultată din fuziuni ale genelor, deleție a unui domeniu de reglare proteică, sau la nivel cellular, cu supraexprimare a proteinelor TRK.
Terapia cu entrectinib, vizează afecțiuni oncologice caracterizate de existența fuziunilor genice intre NTRK, ROS1 și ALK și a demonstrat inhibarea in vitro și in vivo a liniilor celulare tumorale derivate din multiple tipuri de tumori în care se găsesc aceste genele de fuziune. Atât larotrectinib, cât și entrectinib sunt aprobate de către Food and Drug Administration (FDA) din SUA și de către Agenția Europeană a Medicamentului (EMA) fiind confirmate de ghidurile internaționale ca terapie de elecție, atunci când este confirmată prezența genelor de fuziune cu NTRK.22, 23
Metoda de lucru: IHC (imunohistochimică)
Tipuri de specimen recoltat:
fragmente tisulare, recoltate în cursul interventiilor chirurgicale, microchirurgicale sau biopsice, fixate ulterior în formol 10%, histoprocesate și incluse în parafină (blocuri de parafină)
țesut inclus în blocuri de parafină.
Recipient de recoltare:
recipiente cu formol tamponat 10% (adaptate pentru dimensiunile fragmentelor tisulare recoltate, în raport minim de 1:1)
Stabilitate probă
24-72 ore pentru fragmentele tisulare fixate în formol 10%
timp îndelungat, în mediu ambiental, protejate de umezeală și radiațiile solare, pentru blocurile de parafină.
Recomandari utilizare colorație IHC panTRK: -confirmarea prezenței sau absenței proteinelor de fuziune tip TRK, în diverse tipuri de tumori solide
Interpretarea rezultatelor Pan-TRK (familia de proteine tip TRK)
Reacție de culoare tip VENTANA pan-TRK (EPR17341) observată în localizări celulare multiple (nucleară, citoplasmică și membranoasă). Limitări specifice: Testul VENTANA pan-TRK (EPR17341) nu va discrimina între proteinele de fuziune tip TRK de tip sălbatic și cele de tip chimeric. Rezultat negativ:
Absența colorației IHC pan-TRK la nivelul proliferării tumorale Rezultat pozitiv:
Prezența colorației IHC pan-TRK la nivelul proliferării tumorale Metoda de lucru: imunohistochimică (IHC) Tumori pozitive – confirmarea prezenței de proteine de fuziune TRK:
Carcinomul secretor al glandei salivare cu fuziune ETV6-NTRK3 prezintă colorație nucleară și citoplasmatică slabă până la moderată.
Colangiocarcinomul intrahepatic- cu fuziune PLEKHA6-NTRK1 prezintă o colorație intensă la nivel membranar celular.
Adenocarcinomul veziculei biliare- cu fuziune LMNA-NTRK1 prezintă o colorație intensă citoplasmatică și perinucleară.
Carcinomul tiroidian metastatic în țesut moale- cu fuziune TPM3-NTRK1 evidențiază o colorație intensă la nivelul citoplasmei și membranei celulare.
Model algoritm de evaluare fuziuni tip pan-TRK:
Bibliografie:
Khotskaya YB, Holla VR, Farago AF, et al. Targeting TRK Family Proteins in Cancer. Pharmacol Ther.2017;173:58-
Cocco E, Scaltriti M, Drilon NTRK Fusion-Positive Cancers and TRK Inhibitor Therapy. Nat Rev Clin Oncol. 2018;15(12):731-747.
Amatu A, Sartore-Bianchi A, Bencardino K, et Tropomyosin Receptor Kinase (TRK) Biology and the Role of NTRK Gene Fusions in Cancer. Annals of Oncology. 2019;30:VIII5-VIII15.
Wong D, Yip S, Sorensen PH. Methods for Identifying Patients with Tropomyosin Receptor Kinase (TRK) Fusion Cancer. Pathol Oncol Res. 2020;26(3):1385-1399.
Solomon JP, Benayed R, Hechtman JF, et al. Identifying Patients with NTRK Fusion Cancer. Annals of Oncology. 2019;30:VIII16-VIII22.
Kummar S, Lassen UN. TRK Inhibition: A New Tumor-Agnostic Treatment Strategy. Target Oncol. 2018;13(5):545-
Hsiao SJ, Zehir A, Sireci AN, et al. Detection of Tumor NTRK Gene Fusions to Identify Patients Who May Benefit from Tyrosine Kinase (TRK) Inhibitor Therapy. J Mol Diagn. 2019;21(4):553-571.
Marchio C, Scaltriti M, Ladanyi M, et al. ESMO Recommendations on the Standard Methods to Detect NTRK Fusions in Daily Practice and Clinical Research. Ann Oncol. 2019;30(9):1417-1427.
Carson F, Hladik C. Histotechnology: A Self Instructional Text, 3rd edition. Hong Kong: American Society for Clinical Pathology Press; 2009.
Occupational Safety and Health Standards: Occupational exposure to hazardous chemicals in laboratories. (29 CFR Part 1910.1450). Fed. Register.
Directive 2000/54/EC of the European Parliament and Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work.
Roche PC, Hsi ED. Immunohistochemistry-Principles and Advances. Manual of Clinical Laboratory Immunology, 6th edition. In: NR Rose, ed. ASM Press; 2002.
Vaishnavi A, Capelletti M, Le AT, et al. Oncogenic and drug-sensitive NTRK1 rearrangements in lung cancer.Nat Med. 2013;19(11):1469-1472.
Creancier L, Vandenberghe I, Gomes B, et al. Chromosomal rearrangements involving the NTRK1 gene in colorectal carcinoma. Cancer Letter 2015;365:107-111.
Murphy D, Ely H, Shoemaker R, et al. Detecting gene rearrangements in patient populations through a 2-step diagnostic test comprised of rapid IHC enrichment followed by sensitive next-generation sequencing. Appl Immunohistochem Mol Morphol. 2017; 25(7): 513-523.
Doebele RC, Davis LE, Vaishnavi A, et An onogenic NTRK fusion in soft tissue sarcoma patient with response to the tryopomyosin-related kinase (TRK) inhibitor LOXO-101. Cancer Discovery. 2015;5(10):1049-57.
Taipale M, Krykbaeva I, Whitesell L, et Chaperones as thermodynamic sensors of drug-target interactions reveal kinase inhibitor specificities in living cells. Nat Biotech.2013;31:630-7.
Passinen-Sohns A, Koelzer VH, Frank A, et Single-Center Experience with a Targeted Next Generation Sequencing Assay for Assessment of Relevant Somatic Alterations in Solid Tumors. Neoplasia. 2017;19(3):196-206.
Oncomine™ Focus Assay, Part I: Library Preparation USER Document numberMA 0015819.B.0.
Oncomine™ Focus Assay Part II: Plan a Run, Template Preparation, and Sequencing USER GUIDE. Document MA 0015820.A.0.
Velizheva NP, Rechsteiner MP, Valtcheva N, et al. Targeted next-generation sequencing for reliable detection of targetable rearrangements in lung adenocarcinoma—a single center retrospective study. Path research and prac. 2018;214:572-578.
