Informații generale: Test prenatal de detecție rapidă aneuploidii fetale 13, 21, 18, X si Y (QF-PCR).
Context clinic
Anomaliile cromozomiale reprezintă o componentă importantă a afecţiunilor genetice, atât în perioada prenatală, cât şi la naştere. Se estimează că acestea apar cu o frecvenţă de 6-20 la 1000 naşteri viabile. Anomaliile cromozomiale pot duce la aparitia de avorturi spontane recurente, anomalii congenitale la nou-născuți sau diverse sindroame precum: Sindromul Patau, Sindromul Edwards sau Sindromul Down.
Riscul crescut asociat cu vârsta de peste 35 ani a mamei este bine documentat în cazul sindromului Down. Pe baza unor studii populaţionale mari, se estimează că riscul de sindrom Down la vârsta de 24 ani variază de la 1:1294 la 1:1877, în timp ce, la vârsta de 35 ani variază de la 1:250 la 1:404 naşteri. Riscul creşte la 1:44-1:24 la vârsta de 45 ani şi creste si mai mult la femeile cu varsta de peste 45 ani.
Din acest motiv este oportun să se recomande amniocenteză şi efectuarea unui examen citogenetic femeilor cu varsta de peste vârsta de 35 ani, chiar în absenţa unui istoric familial pozitiv pentru afecţiuni genetice. Deoarece au devenit frecvente sarcinile planificate la vârste mai mari, diagnosticul prenatal a devenit un factor important in cadrul medicinei preventive.
Anomaliile numerice pot afecta orice cromozom, însă majoritatea acestora vor duce la aparitia avortului spontan.
Recomandări de testare Test prenatal de detecție rapidă aneuploidii fetale 13, 21,18, X si Y (QF-PCR).
Pe lângă vârsta maternă înaintată (> 35 de ani) recomandarile vor include:
- evidenţierea unui risc crescut la screening-ul conventional- dublu sau triplu test,
- in antecedente nasterea a unui copil cu anomalii cromozomiale,
- anuomalii depistate la ecografia morfo-fetală,
- istoric familial pozitiv de anomalii cromozomiale1;2;3.
Pregătire pacient – nu este necesară.
Specimen recoltat – lichid amniotic (3-5 mL), însoțit obligatoriu de sânge matern recoltat pe EDTA (5 mL)
Recipient de recoltare – vacutainer cu EDTA și recipient adecvat pentru lichid amniotic
Cauze de respingere a probei – probe coagulate; recoltare pe vacutainer incorect; volum insuficient; contaminarea probei
Stabilitate probă – maxim 48 ore din momentul recoltării probei până la procesarea acesteia, de aceea proba trebuie să ajungă în Laboratorul Central Synevo în maxim 24 ore din momentul recoltării.
Metoda – QF-PCR (implică amplificarea și cuantificarea secvențelor de ADN specifice cromozomilor 13, 18, 21, X și Y).
Testul QF-PCR (cuantificare fluorescentă PCR) consta in amplificarea, detecția și analiza unor regiuni specifice ale cromozomilor, care conțin repetiții scurte în tandem (STR) și markeri non-polimorfici, pentru a determina prezența aneuploidiilor cauzate de aberații cromozomiale.
ADN-ul este amplificat utilizând primeri marcați fluorescent, iar ampliconii obținuți sunt separați electroforetic, generând electroforegrame care sunt ulterior analizate cu un software special. Pentru a menține standarde înalte de calitate, probele de lichid amniotic sunt însoțite de o probă de sânge matern, iar profilele rezultate sunt analizate în paralel pentru a elimina posibilitatea contaminării probei primare prenatale cu celule materne.
În anumite situații, probele pot prezenta markeri noninformativi în unul sau mai mulți cromozomi. În acest caz se va recomanda testarea genetică prin metode alternative de tipul cariotipului clasic.
Interpretarea rezultatelor
Analiza permite identificarea trisomiilor cromozomiale comune (13, 18, 21) prin detectarea unei alele suplimentare, evidențiată printr-un raport 1:1:1, 2:1 sau 1:2, care indică prezența unei copii adiționale a cromozomului corespunzător.
Testul QF-PCR poate detecta, de asemenea, aneuploidii ale cromozomilor sexuali, precum Sindromul Turner (45,X) și alte anomalii cromozomiale, cum ar fi triploidia. Aneuploidiile cromozomiale X și Y sunt identificate prin prezența sau absența unui cromozom X sau Y suplimentar.
Limitări și interferențe
Contaminarea cu celule materne sau mozaicismul placentar pot sa conducă la discrepanțe între rezultate. QF-PCR nu poate detecta modificări în afara secvenței țintă a markerilor și nu va detecta rearanjamente echilibrate.
Delețiile și monosomia parțială nu sunt detectate.
Mozaicismul fetal in procent scăzut este posibil să nu fie detectat.
De aceea, intotdeauna va fi necesară analiza in asociere cu analiza de cariotip cromozomial, pentru a caracteriza tipul de aberatie cromozomiala și a determina riscul de recurenta, in cazul unor sarcini viitoare. `
Referințe
- Ann M.Gronowski. Chromosome Analysis in Prenatal Diagnosis. In Handbook of Clinical Laboratory Testing During Pregnancy. Humana Press, USA, Ed. 2004, 139-157.
- Constance K. Stein. Applications of Cytogenetics in Modern Pathology. In Henry’s Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods- Sauders Elsevier 21-Ed 2007, 1267-1281.
- Mayo Clinic/Mayo Medical Laboratories. Test Catalog. Chromosome Analysis, Amniotic Fluid. www.mayomedicallaboratories.com. Ref Type: Internet Communication
- PROFESSIONAL GUIDELINES FOR CLINICAL CYTOGENETICS AND CLINICAL MOLECULAR GENETICS. QF-PCR FOR THE DIAGNOSIS OF THE ANEUPLOIDY BEST PRACTICE GUIDELINES (2012), v3.01, January 2012.
