Programmed cell death – ligand 1 (PD-L1), cunoscut și sub numele de B7 omolog 1 (B7-H1) sau CD274, este o proteină transmembranară implicată în reglarea răspunsul imun mediat celular, prin interacțiunea cu receptorul proteinei 1 – programmed cell death (PD-1). Supraexpresia PD-L1 a fost observată în carcinoamele vezicii urinare, plămânilor, joncțiunii gastrice și gastroesofagiene, timusului, colonului, pancreasului, ovarului, sânului, rinichilor și în melanom și glioblastom. PD-L1 a fost identificat atât ca marker prognostic, cât și ca marker teranostic într-o varietate de neoplasme.
Legarea liganzilor PD-L1 și PD-L2, la receptorul PD-1 de pe suprafața limfocitelor T, inhibă proliferarea limfocitele T și producția de citokine. KEYTRUDA si LIBTAYO, reprezintă clasa terapeutică de anticorpi monoclonali care se leagă de receptorul PD-1 și blochează interacțiunea acestora cu PD-L1 și PD-L2, stimuland răspunsul imun antitumoral.
Indicatii de testare
PD-L1 – IHC 22C3 PharmDx este un test imunohistochimic calitativ destinat detectarii proteinei PD-L1 în:
carcinomului esofagian cu celule scuamoase (ESCC);
cancerului de col uterin;
carcinomului urotelial;
carcinomului cu celule scuamoase al capului și gâtului (HNSCC);
cancerului de sân triplu negativ (TNBC).
Metoda de lucru: imunohistochimie.
Interpretarea histopatologică a colorației PD-L1 trebuie evaluată de către un anatomopatolog certificat, în context clinic, morfologic și a altor criterii histopatologice. Evaluarea colorației sau absența acesteia trebuie completată de teste morfologice și controale adecvate, precum și alte metode diagnostice.
Toate celulele tumorale de pe întreaga secțiune de țesut trebuie analizate și incluse în evaluarea scorului PD-L1. Un minim de 100 celulele tumorale trebuie să fie prezente pe lama colorată PD-L1 pentru ca proba să fie considerată adecvată pentru evaluarea. Orice colorare perceptibilă a membranei celulelor tumorale va fi inclusă în scor. Expresia proteinei PD-L1 este evaluată prin utilizarea scorului TPS, care este procentul de celule tumorale care prezintă colorarea membranei partiala sau completa, la orice intensitate din totalul celulelor tumorale analizate.
TPS (%) = celule de colorate PD-L1 (celule tumorale) / total de celule tumorale × 100
Scor de colorare parțială sau completă a membranei celulare (≥ 1+) va fi perceput distinct de colorarea citoplasmatică. Colorarea citoplasmatică ar trebui să fie considerată colorare nespecifică și este exclusă din evaluarea intensitatii colorarii. Celule normale și celulele imune asociate tumorii, precum limfocitele infiltrante sau macrofagele nu trebuie incluse în scorul pentru determinarea nivelului expresiei PD-L1.
Un minim de 100 de celule tumorale trebuie să fie prezente pe lama colorată PD-L1 pentru ca proba să fie considerată adecvată pentru evaluare. Toate celulele tumorale de pe întreaga secțiune de țesut trebuie analizate și incluse în evaluarea expresiei PD-L1. Distincția intre celulele tumorale, limfocite și macrofage este esențială pentru estimarea exactă a numărătorului. Deși rezultatul calculului poate depăși 100, scorul maxim este definit ca CPS 100.
Celule tumorale cu colorare membranara liniara partiala sau completa (la orice intensitate) care este percepută distinct de colorarea citoplasmatică și
Limfocite și macrofage (celule inflamatorii mononucleare, MICs) dispuse în cuiburi tumorale și/ sau adiacent stromei cu colorare certă a membranei și/sau citoplasmatică (la orice intensitate). Celulele inflamatorii mononucleare trebuie să fie direct asociate cu răspunsul împotriva tumorii.
Interpretare microscopica:
Colorație imunohistochimică PD-L1 clona 22C3. (a) Lama de control negativ. (b) Lama de control pozitiv tipica, cu celule pozitive 80%. (c) Un caz reprezentativ c lipsă de expresie pentru PD-L1, scorul proporției tumorale < 1%. (d) Un caz reprezentativ cu expresie scăzută pentru PD-L1, scor proporțional tumoral de la 1 la 49%. (c) Un caz reprezentativ de expresie ridicată pentru PD-L1, scorul proporției tumorii ≥ 50%. Săgețile indică celulele tumorale pozitive cu colorare membranoasă. Mărire originală, 200x
Limitari generale:
Colorarea țesutului depinde de manipularea și prelucrarea țesutului înainte de colorare. Fixare necorespunzătoare, congelarea, dezghețarea, spălarea, uscarea, încălzirea, secționarea sau contaminarea cu alte țesuturi sau fluide pot produce artefacte, capturarea anticorpilor sau rezultate fals negative. Rezultatele inconsecvente se pot datora variațiilor metodelor de fixare și încorporare sau neregularitatilor inerente țesutul.
Contrastarea excesivă sau incompletă poate compromite interpretarea corectă a rezultatelor.
Țesuturile provenite de la persoane infectate cu virusul hepatitei B și care conțin antigen de suprafață al hepatitei B (HBsAg) pot prezenta colorare nespecifica cu peroxidază de hrean.
Rezultate fals pozitive pot fi observate din cauza legării non-imunologice a proteinelor sau a produșilor de reacție a substratului. Ele pot fi, de asemenea,cauzate de activitatea pseudoperoxidazei (eritrocite) și a peroxidazei endogene (citocromul C).
Reactivii pot produce reacții neașteptate în tipuri de țesuturi netestate Posibilitatea unor reacții neașteptate chiar și la tipurile de țesuturi testate nu pot fi eliminate complet din cauza variabilității biologice a expresiei antigenului în neoplasme sau alte tipuri de țesuturi patologice.
Bibliografie:
Garon, E. B.; Rizvi, N. A.; Hui, R.; et al. Pembrolizumab for the Treatment of Non-Small-Cell Lung Cancer. Engl. J. Med.2015, 372 (21), 2018–2028.
Keytruda® Package
Mok, T. S. K.; Wu, Y. L.; Kudaba, I.; et al. Pembrolizumab versus Chemotherapy for Previously Untreated, PD-L1- Expressing, Locally Advanced or Metastatic Non-Small-Cell Lung Cancer (KEYNOTE-042): A Randomised, Open-Label, Controlled, Phase 3 Trial. Lancet 2019, 393 (10183), 1819–1830.
Reck, ; Rodriguez-Abreu, D.; Robinson, A. G.; et al. Pembrolizumab versus Chemotherapy for PD-L1-Positive Non- Small- Cell Lung Cancer (KEYNOTE-024). N. Engl. J. Med. 2016, 375 (19), 1823–1833.
Herbst, R. S.; Baas, P.; Kim, D. W.; et al. Pembrolizumab versus Docetaxel for Previously Treated, PD-L1-Positive, Advanced Non-Small-Cell Lung Cancer (KEYNOTE-010): A Randomised Controlled Trial. Lancet 2016, 387 (10027), 1540–1550.
Fuchs, C. S.; Doi, T.; Jang, R. W.; et al. Safety and Efficacy of Pembrolizumab Monotherapy in Patients with Previously Treated Advanced Gastric and Gastroesophageal Junction Cancer: Phase 2 Clinical KEYNOTE-059 Trial. JAMA Oncol. 2018, 4 (5).
Kojima, ; Muro, K.; Francois, E.; et al. Pembrolizumab versus Chemotherapy as Second-Line Therapy for Advanced Esophageal Cancer: Phase III KEYNOTE-181 Study. J. Clin. Oncol. 2019, 37 (4), 2–2.
Chung, H. C.; Schellens, J. H. M.; Delord, J.-P.; et al. Pembrolizumab Treatment of Advanced Cervical Cancer: Updated Results from the Phase 2 KEYNOTE-158 Study. Clin. Oncol. 2018, 36 (15), 5522–5522.
Schellens, J. H. M.; Marabelle, A.; Zeigenfuss, S.; et al. Pembrolizumab for Previously Treated Advanced Cervical Squamous Cell Cancer: Preliminary Results from the Phase 2 KEYNOTE-158 J. Clin. Oncol. 2017, 35 (15), 5514– 5514.
Balar, A. V.; Castellano, D.; O’Donnell, P. H.; et al. First-Line Pembrolizumab in Cisplatin-Ineligible Patients with Locally Advanced and Unresectable or Metastatic Urothelial Cancer (KEYNOTE-052): A Multicentre, Single-Arm, Phase 2 Study. Lancet Oncol. 2017, 18 (11), 1483–1492.
Burtness B, Harrington KJ, Greil R, et al. Pembrolizumab alone or with chemotherapy versus cetuximab with chemotherapy for recurrent or metastatic squamous cell carcinoma of the head and neck (KEYNOTE-048): a randomised, open-label, phase 3 study. Lancet 2019, 394 (10212),1915-1928.
Cortes, J.; Cescon, D.W.; Rugo, H.S.; et al. KEYNOTE-355: Randomized, double-blind, phase III study of pembrolizumab + chemotherapy versus placebo + chemotherapy for previously untreated locally recurrent inoperable or metastatic triplenegative breast cancer [abstract]. In ASCO; 2020.
LIBTAYO® Package Insert
Sezer, A.; Kilickap, S.; Gümüş, M.; et al. Cemiplimab Monotherapy for First-Line Treatment of Advanced Non-Small- Cell Lung Cancer with PD-L1 of at Least 50%: A Multicentre, Open-Label, Global, Phase 3, Randomised, Controlled Lancet 2021, 397 (10274), 592–604.
Phelps, R. M.; Johnson, B. E.; Ihde, D. C.; et al. NCI-Navy Medical Oncology Branch Cell Line Data Base. Cell. Biochem.
