Test de transformare limfoblastică (LTT) – funcție imună

Această analiză se poate recolta doar în anumite centre Synevo, conform unui program special, din cauza stabilității reduse a probei recoltate:

• Alba Iulia: recoltarea se efectuează în prima și ultima zi de marți din lună în Centrul de recoltare Alba Iulia (B-dul Revoluției 1989, nr. 47, bl. CF 1, parter), în intervalul orar 09:00 – 10:00, cu programare telefonică (0757.112.409/ 0258.701.544).
• Alexandria: recoltarea se efectuează în zilele de marți în Centrul de recoltare Alexandria (Str. Libertății, bl. K3), în intervalul orar 11:00 – 12:00.
• Arad: recoltarea se efectuează în zilele de luni Centrul de recoltare Banu Mărăcine (Str. Banu Maracine, nr. 24, bl.1/A, sc. D, parter) și Centrul de recoltare Revoluției (B-dul Revoluției, nr. 90, Sc. A, Ap. 14) Centrul de recoltare Aurel Vlaicu (Calea Aurel Vlaicu, bl. Z28, sc. D, parter, ap.25C), în intervalul orar 11:00 – 12:00 și în Laborator și centru de recoltare Arad (Str. Lt. Mj. Duma, nr.1, Bl. 338, Sc. A, Ap. 21, Parter), în intervalul orar: 11:00 – 12:30.
• Baia Mare: recoltarea se efectuează în cea de-a doua zi de marți a lunii în curs în Centrul de recoltare Republicii (B-dul Republicii, nr. 2, corp C1), în intervalul orar 07:00 -08:00.
• Bistrița: recoltarea se efectuează în Centrul de recoltare din Bistrița (Str. Grigore Bălan, nr. 52), în zilele de marți, în intervalul orar 10:00 – 11:00, cu o programare efectuată în prealabil la numarul de telefon aferent centrului de recoltare.
• Brăila: recoltarea se efectuează în zilele de marți în Centrul de recoltare Dorobanților (B-dul Dorobantilor, nr 5, Bl. A5, Parter), în intervalul orar 07:00 -08:00, cu programare telefonică.
• Brașov: recoltarea se efectuează în zilele de marți în Laborator și centru de recoltare Aurel Vlaicu (Str. Aurel Vlaicu nr. 2), în intervalul orar 10:00 – 11:00, cu programare telefonică (0268 424 072/ 073).
• București & Ilfov: recoltarea se efectuează în baza unei programări telefonice în call center (021 9666) în zilele de marți, în intervalul orar 11:30 – 13:00 în Laborator și centru de recoltare Iancu de Hunedoara ( B-dul Iancu de Hunedoara, nr. 29F) și Centrul de recoltare Ștefan cel Mare (Șos. Ștefan cel Mare, nr. 56, bl. 38, parter), precum și în Laborator și centru de recoltare Chiajna (Str. Industriilor, nr. 25, Chiajna, Ilfov) în intervalul orar 11.00 – 14.00.
  • În zilele de miercuri, în intervalul orar 11:30 – 13:00 în Centrul de recoltare Plevnei (Calea Plevnei nr. 96, Sector 1) și în Laborator și centru de recoltare Chiajna (Str. Industriilor, nr. 25, Chiajna, Ilfov) în intervalul orar 11.00 – 14.00.
• Buzău: recoltarea se efectuează în zilele de marți în Centrul de recoltare Marghiloman (Str. Al. Marghiloman, Cartier Bazar – Obor, bl. 2B, parter), în intervalul orar 12:00 – 14:00.
• Câmpia Turzii: recoltarea se efectuează în Centrul de recoltare din Câmpia Turzii (Str. Avram Iancu, nr. 33,), în zilele de marți, în intervalul orar 10:00 – 11:00, cu o programare efectuată în prealabil la numarul de telefon aferent centrului de recoltare.
• Cluj: recoltarea se efectuează în oricare centru de recoltare din Cluj, în zilele de marți, în intervalul orar 10:30 – 11:30, cu o programare efectuată în prealabil la numarul de telefon aferent fiecărui centru.
• Constanța: recoltarea se efectuează în Centrul de recoltare Cartier Km 5 (Sos. Mangaliei, nr. 118 – 120) în fiecare marți din lună, în intervalul orar 07:00 – 09:00, cu o programare efectuată în prealabil la numarul de telefon 0241615785.
• Craiova: recoltarea se efectuează în zilele de marți în Laborator și centru de recoltare Craiova (Str. Alexandru Macedonski nr. 53, corp C2), în intervalul orar 07:30 – 09:00, cu programare telefonică la numerele de telefon 0251.530.040/ 0251.532.299.
• Deva: recoltarea se efectuează în prima și ultima zi de marți din lună în Centrul de recoltare Deva (Bd. 1 Decembrie nr. 2, bl. 4, parter), în intervalul orar 09:00 – 10:00, cu programare telefonică (‪0751 126 077/ 0254 262 112).
• Focșani: recoltarea se efectuează în zilele de marți în Centrul de recoltare Republicii Focșani (Str. Republicii, nr. 11), în intervalul orar 07:00 – 10:00, cu programare telefonică (‪0743 161 401).
• Hunedoara: recoltarea se efectuează în prima și ultima zi de marți din lună în Centrul de recoltare Hunedoara (Str. Mihai Viteazu, nr. 5, bl. W, sc. C, ap. 38, Mun. Hunedoara), în intervalul orar 08:00 – 09:00, cu programare telefonică (0755 058 617).
• Galați: recoltarea se efectuează  în zilele de marți în Laborator și centru de recoltare Galați (B-dul George Cosbuc nr. 251, Bl. Italian Residence), în intervalul orar 07:30 -08:30, cu programare telefonică (0236455671)
• Giurgiu: recoltarea se efectuează în zilele de marți în Centrul de recoltare Giurgiu (Str. Nicolae Bălcescu, bl. V32), în intervalul orar 10:30 – 11:30.
• Oradea: recoltarea se efectuează în zilele de luni în Centrul de recoltare Nufărul (Str. Nufărului, nr. 67), Centrul de recoltare Magheru (Bulevardul Magheru, nr. 8, bl. M8, parter) și Centrul de recoltare Decebal (B-dul. Decebal, nr. 22, bl. c104/b), în intervalul orar 10:00 – 11:00.
• Pitești: recoltarea se efectuează în zilele de marți în Centrul de recoltare Centrul de recoltare Victor Babeș (Str. Dr. Victor Babeș, nr.12), în intervalul orar 13:00 – 14:00.
• Ploiești: recoltarea se efectuează în zilele de marți în Centrul de recoltare Gheorghe Doja (Str. Ion Maiorescu, FN, Bloc 33 N1, parter – vis-a-vis de sediul BCR Ploiești), în intervalul orar 11:00 – 13:00.
• Râmnicu Vâlcea: recoltarea se efectuează în zilele de marți în Centrul de recoltare Râmnicu Vâlcea 1 (Calea lui Traian nr. 183, bl. 15, parter), în intervalul orar 12:00 – 13:00 și Centrul de recoltare Râmnicu Vâlcea 2 (B-dul Tineretului, nr. 3, bl A11/3, parter), în intervalul orar 11:00 – 12:00.
• Satu Mare: recoltarea se efectuează în cea de-a doua zi de  marți a lunii în curs în Laborator și centru de recoltare Satu Mare (Str. Prahova, nr.22),  în intervalul orar 07:00 -08:00.
• Sibiu: recoltarea se efectuează în în prima și ultima zi de marți din lună în Laborator și centru de recoltare Sibiu (Calea Dumbrăvii, nr. 17),  în intervalul orar 09:00 – 11:00, cu programare telefonică (0269 243 361/ 0741 215 858)
• Târgoviște: recoltarea se efectuează în zilele de marți în Centrul de recoltare Târgoviște (Str. Col. Dumitru Băltărețu nr. 70, parter), în intervalul orar 10:00 – 12:00
• Târgu Mureș: recoltarea se efectuează centrul de recoltare din Târgu Mureș (Str. Livezeni, nr. 3), în zilele de marți, în intervalul orar 10:00 – 11:00, cu o programare efectuată în prealabil la numarul de telefon aferent centrului de recoltare.
• Timișoara: recoltarea se efectuează în zilele de luni în Laborator și centru de recoltare Timișoara (Str. Simion Bărnuţiu, nr. 21), în intervalul orar 11:00 – 13:00 și în Centrul de recoltare Tudor Vladimirescu (Splaiul Tudor Vladimirescu, Nr. 10, Demisol), în intervalul orar 11:00 – 13:00.
• Zalău: recoltarea se efectuează  în ultima zi de luni a lunii în curs în Centrul de recoltare Zalău (B-dul Mihai Viteazul, nr. 14, Bl O1, parter), în intervalul orar 07:00 -08:00.

Informaţii generale Test de transformare limfoblastică (LTT) – funcție imună

O indicaţie importantă a LTT este evaluarea imunocompetenţei limfocitare antiinfecţioase la persoane cu suspiciune clinică de imunodeficienţe congenitale sau dobândite care afectează imunitatea mediată celular.

Printre imunodeficienţele congenitale se numără imunodeficienţa severă combinată, imunodeficienţa comună variabilă, imunodeficienţa X-linkată cu hiper IgM, disgenezia reticulară, sindrom DiGeorge, sindrom Nezelof, sindrom Wiskott-Aldrich, ataxie-telangiectazie, candidiaza muco-cutanată cronică.

Deficitele imune celulare dobândite ale sistemului imunitar apar uneori spontan sau sunt consecinţa marilor intervenţii chirurgicale şi chimio/radioterapiei în cadrul tratamentului bolilor maligne. Deficitele funcţiei imune pot conduce la diverse afecţiuni. Simptomele clinice cardinale sunt: rezistenţa scăzută la infecţii a mucoaselor căilor respiratorii superioare şi a intestinului, o convalescenţă prelungită după infecţii acute (mai ales la vârstnici), ca şi tulburări ale vindecării plăgilor. Acţiunea conjugată a hormonilor, sistemului nervos şi a celui imunitar contribuie la complexitatea apărării imune faţă de agenţi patogeni şi celule tumorale.

Printre cauzele frecvente ale funcţiei imune deficitare se numără carenţele alimentare, stresul cronic, bolile alergice (mai ales reacţiile de tip imediat) şi unele infecţii cronice (de exemplu: HIV, CMV, EBV)².

Un istoric clinic de infecţii oportuniste şi un număr absolut de limfocite scăzut în hemoleucogramă ar trebui să conducă imediat la investigarea funcţiei limfocitelor T. In special candidiaza mucocutanată cronică constituie un indicator pentru o funcţie alterată a celulelor T, fiind caracterizată prin extinderea infecţiei candidozice de la membranele mucoase la tegumente şi afectarea unghiilor cu inflamaţie granulomatoasă.

Informaţii utile privind capacitatea funcţională a limfocitelor T poate fi obtinuţă prin evaluarea răspunsurilor proliferative in vitro ale acestor celule la diferiţi stimuli – testul de transformare limfoblastică (LTT). Mitogenii, antigenele şi aloantigenele sunt stimuli care determină proliferarea limfocitelor T. Mitogenii sunt reprezentaţi, de obicei, de extracte de plante (fitohemaglutinina – PHA, poke weed mitogen – PWM, concanavalin A – Con A) lipsite de specificitate, care stimulează policlonal atât limfocitele CD4+ cât şi cele CD8+.

Aloantigenele de pe celulele unui donator străin stimulează, de asemenea, nespecific celulele CD4+ şi CD8+. Chiar pacienţii cu o funcţie semnificativ alterată a limfocitelor T pot prezenta încă răspunsuri proliferative la aceşti stimului, indicând doar prezenţa celulelor T şi nu capacitatea acestora de a distruge agenţii infecţiosi. Din acest motiv este necesar să fie studiate şi răspunsurile proliferative la antigene specifice care reprezintă un indicator al abilităţii gazdei de a rezista la infecţie¹.

Până acum era foarte greu să se cuantifice afectarea funcţiei imune, de aici dificultatea de a lua măsuri terapeutice de stimulare imună şi de a controla eficacitatea acestora. La fel de dificil era de a conduce în mod corect o terapie imunosupresivă,  astfel încât să se atingă gradul dorit de imunosupresie fără a creşte riscul infecţios şi tumoral al acestor pacienţi.

Testele cutanate nu puteau fi cuantificate şi nu mai sunt disponibile. Cu LTT s-a dezvoltat o metodă care permite măsurători cantitative ale capacităţii funcţionale a celulelor imune din sânge. Testul se bazează pe principiul stimulării limfocitelor cu ajutorul unor antigene reprezentate de componente prelucrate ale agentilor patogeni sau vaccinuri (antigene de memorie) care la persoanele imunocompetente provoacă o reactivitate imună puternică.

Aceste antigene provin de la Candida albicans, toxoidul tetanic, mycobaterii (PPD), virusul gripal, virusul varicelo-zosterian, citomegalovirus. Controlul mitogen este reprezentat de PWM. Testul a fost îmbunătăţit prin adăugarea de alfa-interferon, glutamină şi ser autolog care cresc stimularea antigen-specifică^1;2.

Antigenele sunt prelucrate de către monocite şi celulele dendritice şi prezentate limfocitelor T-helper. Acestea sunt activate în corelaţie cu funcţia imună actuală şi stimulate să se dividă; sinteza obligatorie de acizi nucleici este determinată cantitativ în beta-counter. O activare puternică în LTT este posibilă atunci când funcţia imună este intactă şi eventual în cazurile în care s-a ajuns la o funcţie îmbunătăţită prin terapie imunostimulatoare.

Competenţa imună este evaluată cantitativ cu ajutorul indexului funcţional mediu (rezultat ca o medie a valorilor indexului de stimulare SI pentru fiecare antigen de memorie)^2;3.

Recomandări pentru determinarea LTT – funcţie imună

• infecţii recurente, acute sau cronice;
• la pacienţii neoplazici,  pentru determinarea statusului imun înainte şi după intervenţii chirurgicale; chimioterapie sau radioterapie, ca şi în cursul tratamentelor de imunostimulare;
• infecţia HIV – determinarea statusului imun, înainte şi după terapia antivirală (evaluarea restabilirii funcţiei imune);
• alimentatie deficitară (deficit de vitamine, zinc, fier);
• controlul terapiei imunosupresoare la pacienţi cu boli autoimune sau cu transplant alogen de organe²;
• evaluarea recuperării funcţionale a celulelor T după transplantul cu celule stem hematopoietice³.

LTT permite, mai ales împreună cu determinarea cantitativă a celulelor imunocompetente din sânge, o analiză cuprinzătoare a competenţei imune a pacientului. De aici provin indicii importante pentru conducerea terapiei imunomodulatoare. Se poate dovedi eficienţa, respectiv lipsa acesteia, ceea ce face posibilă corectarea terapiei².

Specimen recoltat – sânge venos²

Recipient de recoltare – vacutainer cu heparinat de litiu; vacutainer fără anticoagulant cu gel activator²

Volum probă – 20 mL sânge heparinat şi 5 mL ser²

Stabilitate probă – sângele trebuie să ajungă în maxim 24 ore la laboratorul la care se efectuează testul şi în această perioadă se păstrează la temperatura camerei. Este contraindicată refrigerarea probei²

Cauze de respingere a probei – specimene care au depăşit intervalul de stabilitate, probe refrigerate sau congelate²

Metoda – încorporarea unui nucleozid radioactiv (timidina) în ADN-ul celular².

Valori de referinţă şi interpretarea rezultatelor

Limite şi interferenţe

Bibliografie